RT-PCR是檢測(cè)新型冠狀病毒核酸最廣泛、最準(zhǔn)確的篩選和確認(rèn)方法。大規(guī)模的核酸檢測(cè)將不可避免地引起相關(guān)機(jī)構(gòu)和單位重視建立標(biāo)準(zhǔn)化的臨床PCR實(shí)驗(yàn)室。
01新冠核酸檢測(cè)PCR實(shí)驗(yàn)室建設(shè)依據(jù)
新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室生物安全指南（第二版）、GB19489-2008《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》、GB50346-2011《生物安全實(shí)驗(yàn)室建筑技術(shù)規(guī)范》、WS233-2017《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則》、《臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理暫行辦法》衛(wèi)生部、《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室管理辦法》衛(wèi)辦醫(yī)政發(fā)【2010】194號(hào)、《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室工作導(dǎo)則》。
02初步了解PCR實(shí)驗(yàn)室
實(shí)驗(yàn)室內(nèi)會(huì)為核酸檢測(cè)準(zhǔn)備4個(gè)區(qū)域，分別是試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣本準(zhǔn)備區(qū)、擴(kuò)增區(qū)、擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。
其中試劑準(zhǔn)備區(qū)負(fù)責(zé)接收患者樣本，樣本準(zhǔn)備區(qū)則負(fù)責(zé)進(jìn)行對(duì)樣本的核酸進(jìn)行提取，擴(kuò)增區(qū)則是擴(kuò)增復(fù)制核酸樣本，擴(kuò)增后分析區(qū)就是分析樣本內(nèi)核酸能能否與標(biāo)準(zhǔn)樣配對(duì)，通過(guò)儀器檢測(cè)的到，就判斷成陽(yáng)性，如果檢測(cè)不到就是陰性。
PCR實(shí)驗(yàn)室分類(lèi)：普通PCR實(shí)驗(yàn)室、全自動(dòng)定量PCR實(shí)驗(yàn)室、一體自動(dòng)化分析PCR實(shí)驗(yàn)室。
PCR實(shí)驗(yàn)室功能區(qū)域：
試劑準(zhǔn)備區(qū)：是PCR實(shí)驗(yàn)室中最為“潔凈”的區(qū)域，它不應(yīng)有任何核酸成分的存在，否則將嚴(yán)重影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。標(biāo)本的制備應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。
主要設(shè)備：冰箱、低溫冰箱、混勻器、微量加樣器（0.2-1000ul）、移動(dòng)紫外燈。
樣本準(zhǔn)備區(qū)：核酸提取、貯存，擴(kuò)增反應(yīng)管制作。
主要設(shè)備：冰箱、超低溫冰箱、高速冷凍離心機(jī)、混勻器、微量加樣器（0.2-1000ul）、移動(dòng)紫外燈、水浴鍋、生物安全柜。
擴(kuò)增區(qū)：擴(kuò)增反應(yīng)體系的配置和核酸的提取加入要在擴(kuò)增區(qū)內(nèi)進(jìn)行。
主要設(shè)備：擴(kuò)增儀、離心機(jī)、微量加樣器（0.2-1000ul）、移動(dòng)紫外燈。
擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)：產(chǎn)物分析區(qū)最后一個(gè)工作區(qū)域，用于擴(kuò)增片段的分析。
主要設(shè)備：凝膠成像分析儀、電泳儀、電泳槽、微量加樣器（0.2-1000ul）、移動(dòng)紫外燈。
PCR實(shí)驗(yàn)室工作流向
進(jìn)入各工作區(qū)域必須嚴(yán)格按照單一方向進(jìn)行。即試劑準(zhǔn)備區(qū)→樣本準(zhǔn)備區(qū)→擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。
03新冠核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)參數(shù)（供參考）
一般情況下，PCR實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有嚴(yán)格的凈化要求，因此有必要根據(jù)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容來(lái)確定實(shí)驗(yàn)室的潔凈度。當(dāng)PCR實(shí)驗(yàn)樣品需要保護(hù)時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)設(shè)潔凈空調(diào)系統(tǒng)。對(duì)于新冠核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，建議設(shè)置10萬(wàn)級(jí)凈化。
04新冠核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)的幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)
1.平面布局：不論是組合式還是分散式布置的PCR實(shí)驗(yàn)室，各功能房間均宜設(shè)置獨(dú)立緩沖間。
1）試劑準(zhǔn)備區(qū)是工藝流線(xiàn)的開(kāi)始，設(shè)計(jì)為正壓或常壓，避免外界環(huán)境的污染。
2）樣品制備區(qū)一般為常壓或負(fù)壓，大多數(shù)情況下設(shè)計(jì)成二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室，避免實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物溢出，污染外界環(huán)境。
3）核酸擴(kuò)增區(qū)為負(fù)壓，避免實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物溢出，污染外界環(huán)境。
4）產(chǎn)物分析區(qū)是最主要的擴(kuò)增產(chǎn)物污染來(lái)源，通常壓力設(shè)計(jì)為最低，避免實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物溢出，污染外界環(huán)境。
2.區(qū)域空氣流向：為避免交叉污染，PCR實(shí)驗(yàn)室空氣流向必須嚴(yán)格遵循單一方向進(jìn)行，即只能從試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴(kuò)增反應(yīng)混合物配制和擴(kuò)增區(qū)→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)。
3.通風(fēng)空調(diào)：為避免交叉污染，各功能用房?jī)?nèi)空氣不能摻混�；旌鲜絇CR實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采用新風(fēng)直流空調(diào)系統(tǒng)，當(dāng)采用新風(fēng)系統(tǒng)有困難時(shí)，各區(qū)域的空氣只能在自己的房間內(nèi)循環(huán)。
4.生物安全：按照新型冠狀病毒實(shí)驗(yàn)室生物安全指南（第二版）的規(guī)定，2019-nCoV病原體暫按照第二類(lèi)病原微生物進(jìn)行管理，則樣本植被區(qū)宜為負(fù)壓或加強(qiáng)型P2實(shí)驗(yàn)室，核酸操作應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行。
5.關(guān)鍵技術(shù)措施包括：
*絕對(duì)負(fù)壓（避免室內(nèi)潛在污染外泄）
*氣流組織（室內(nèi)定向流，從低污染風(fēng)險(xiǎn)區(qū)流向高污染風(fēng)險(xiǎn)區(qū)）
*排風(fēng)無(wú)害化處理（高效過(guò)濾、高空排放）
05新冠核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室氣流組織建議
（1）氣流組織宜采用上送下排，送風(fēng)口和排風(fēng)口布置應(yīng)使室內(nèi)氣流停滯的空間降低到最小程度。
（2）在生物安全柜操作面或其他有氣溶膠操作地點(diǎn)的上方附件不得設(shè)送風(fēng)口。
（3）高效過(guò)濾器排風(fēng)口應(yīng)設(shè)在室內(nèi)被污染風(fēng)險(xiǎn)最高的區(qū)域，單向布置，不得有障礙。
（4）不能以回（排）風(fēng)夾墻代替排風(fēng)直管，排風(fēng)高效過(guò)濾裝置與排風(fēng)總管的連接必須全部是實(shí)體風(fēng)管。
06新冠核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室裝飾裝修
核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室有設(shè)計(jì)理念、裝修要求、凈化空調(diào)系統(tǒng)、通風(fēng)、自控、工藝設(shè)備等幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)。
材質(zhì)：隔墻及吊頂——凈化彩鋼板、地面——同質(zhì)透芯PVC地板、凈化實(shí)驗(yàn)室專(zhuān)用門(mén)、觀(guān)察窗；
要求：
1.墻面：光潔、不產(chǎn)塵積塵、耐腐蝕，易清潔消毒、無(wú)縫隙；
2.地面：防靜電、耐腐蝕、無(wú)縫隙、無(wú)滲漏；
3.陰陽(yáng)角：均用圓弧角密封處理；
4.門(mén)：必須設(shè)置自動(dòng)互鎖(機(jī)械或電子)；
凈化空調(diào)、通風(fēng)系統(tǒng)、自控系統(tǒng)
1.避免交叉污染，采用全新風(fēng)空調(diào)系統(tǒng)；
2.樣品制備區(qū)嚴(yán)格按照BSL-2設(shè)計(jì)施工；
3.排風(fēng)系統(tǒng)全部按照要求采用高效過(guò)濾器凈化；
4.氣流組織：采用上送下排形式；
5.壓力梯度控制通過(guò)微壓差計(jì)及精密自控系統(tǒng)控制；
6.實(shí)驗(yàn)室入口處顯示房間內(nèi)各項(xiàng)指標(biāo)參數(shù)，并設(shè)置偏離報(bào)警；
07工藝設(shè)備
1.實(shí)驗(yàn)臺(tái)下部均留空，無(wú)死角；
2.全部采用不銹鋼304制作；
3.樣品制備區(qū)生物安全柜；
4.樣品制備區(qū)設(shè)置洗眼裝置，必要時(shí)應(yīng)有應(yīng)急噴淋裝置；
5.非接觸式操作理念(感應(yīng)式水龍頭、感應(yīng)式自動(dòng)門(mén)、互鎖傳遞窗等)；
實(shí)驗(yàn)室建設(shè)涉及到材料選擇、穩(wěn)定性、精度控制等多個(gè)技術(shù)和知識(shí)領(lǐng)域。不同的實(shí)驗(yàn)室由于試驗(yàn)樣品和試驗(yàn)方法的不同，對(duì)實(shí)驗(yàn)室建設(shè)有不同的要求�？梢哉f(shuō)有很多不同之處。一個(gè)完善的實(shí)驗(yàn)室在分析檢測(cè)中起著重要的作用，對(duì)保證實(shí)驗(yàn)室工作人員的健康也起著重要的作用。
